麻省大學(xué)陳大學(xué)的研究探索了AAV載體制造的差異顯示了方法的明顯贏家

麻省大學(xué)陳醫(yī)學(xué)院Horae基因治療中心的一篇論文可能會解決關(guān)于如何最好地制造用于基因治療的腺相關(guān)病毒(AAV)載體的長期爭論。這篇論文在線發(fā)表在《人類基因治療》雜志上，描述了使用AAV基因組群體測序(AAV-GPseq)來探索由兩種常見生產(chǎn)管道產(chǎn)生的載體的基因組。一種是基于人類腎細(xì)胞;另一個是關(guān)于昆蟲細(xì)胞。一種方法是明顯的贏家。

“我在Horae基因治療中心的同事使用一種復(fù)雜的下一代測序方法來創(chuàng)建以前無法實(shí)現(xiàn)的載體基因組表征的詳細(xì)程度，這表明在這項(xiàng)研究中有一個不折不扣的贏家：哺乳動物細(xì)胞中產(chǎn)生的載體遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于昆蟲細(xì)胞中產(chǎn)生的載體，“特倫斯·弗洛特醫(yī)學(xué)博士，西莉亞和艾薩克·海達(dá)克教授，陳曾熙醫(yī)學(xué)院院長，麻省大學(xué)陳氏醫(yī)學(xué)院教務(wù)長兼常務(wù)副校長說。在我看來，昆蟲細(xì)胞載體中基因組片段和未解析的終末重復(fù)序列的百分比高得令人無法接受。這是一項(xiàng)重要的工作，應(yīng)該會影響到這個領(lǐng)域。

PhillipW.L.Tai博士，微生物學(xué)和生理系統(tǒng)助理教授，該研究的通訊作者說：“腺相關(guān)病毒載體一直處于有效和安全的基因治療平臺的最前沿。在這里，我們描述了使用下一代測序方法量化載體基因組異質(zhì)性的新方法，并且我們能夠證明不同的生產(chǎn)平臺產(chǎn)生不同類型和豐度的非單位長度基因組。這些發(fā)現(xiàn)表明，關(guān)于如何生產(chǎn)安全有效的基因治療載體，還有很多需要學(xué)習(xí)的地方。盡管這些類型的生物療法有希望，但質(zhì)量控制管道新技術(shù)的開發(fā)對于確保突破性藥物的安全至關(guān)重要。

在過去的二十年中，AAV載體制造取得了顯著的進(jìn)步，以滿足臨床前和臨床試驗(yàn)的大規(guī)模生產(chǎn)需求。此外，AAV載體的安全性和有效性已被廣泛研究，世界各地的研究人員在此過程中進(jìn)行了許多改進(jìn)，包括選擇載體生產(chǎn)中使用的細(xì)胞系。但是，空的AAV衣殼和含有不完整或不準(zhǔn)確的載體基因組的顆粒的存在長期以來一直是一個令人關(guān)注的問題，因?yàn)檩d體中所含的治療材料的劑量必須精確計(jì)算?？盏囊職せ虿煌暾挠行лd荷可能會改變這些計(jì)算。

有幾種方法可以將空衣殼與全顆粒分離，但沒有一種技術(shù)可以產(chǎn)生不含空或部分衣殼的載體，并且完整，中間和空衣殼的確切基因組組成在很大程度上仍然是未知的。

在這項(xiàng)研究中，Tai博士及其同事使用AAV-GPseq測序來探索由兩種常見生產(chǎn)管道產(chǎn)生的載體基因組的組成：人胚胎腎細(xì)胞中的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和果蠅昆蟲細(xì)胞中的桿狀病毒表達(dá)載體。結(jié)果表明，源自昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)制造的相同結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)的載體比人類腎細(xì)胞生產(chǎn)產(chǎn)生的載體產(chǎn)生更高程度的截?cái)嗪臀唇馕鑫锓N。

“這些令人驚訝的發(fā)現(xiàn)為載體的功效，安全性以及如何量化和評估臨床載體提供了新的線索，”Tai說。