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1、全基因合成:一般對于分子較小而又不易得到的基因采用該方式。
2、可將X鏈基因分成若干寡核苷酸單鏈片段(尤其待合成基因在100 個核苷酸以上時),每個片段長度控制在40~60個堿基,并使每對相鄰互補的片段之間約有6 個堿基交叉重疊。
3、在體外將除基因兩端末端外的所有片段磷酸化。
4、混合退火后加人DNA 連接酶,即可得到較大的基因片段。
5、如果需連接亞克隆的方法,最后將亞克隆的較大片段重組為完整的基因。
6、采用分步連接、亞克隆的方法時,為便于從亞克隆中回收基因片段,應(yīng)在片段兩側(cè)設(shè)計合適的酶切位點。
7、由于每個亞克隆可以分別鑒定,因此可減少順序錯誤的可能性。
8、在解釋全基因合成前,先了解一下什么是“基因”下面收錄了對\\1,基因是存在于細胞內(nèi)有自體繁殖能力的遺傳單位·2,基因是一個具有遺傳功能的特定核苷酸序列的DNA片段·3,編碼一個RNA或一條多肽鏈的DNA片段稱為一個基因·4,基因是生物體遺傳的基本單位,存在于細胞的染色體上,作直線排列·5,基因是生物體內(nèi)一切具有自主復(fù)制能力的最小遺傳功能單位,其物質(zhì)基礎(chǔ)是一條以直線排列·具有特定核苷酸序列的核酸片段·由眾多基因構(gòu)成了染色體·每個基因大體在1000-1500bp的范圍,相對分子質(zhì)量約為670000.。
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